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Stbl3感受態(tài)細(xì)胞的簡(jiǎn)要說(shuō)明

更新時(shí)間:2025-02-26      點(diǎn)擊次數(shù):500
Stbl3菌株來(lái)源于HB101 E.coli strain,是慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株。基因組含有重組酶recA13突變,可有效抑制長(zhǎng)片段末端重復(fù)區(qū)的重組,降低錯(cuò)誤重組的概率;但不含核酸酶endA1突變,體內(nèi)核酸酶含量較高,提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液。此菌株具有LIAN霉素抗性,不存在lacIqZΔM15,不可用于藍(lán)、白斑篩選。 
High5TM系列Stbl3感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,經(jīng)pUC19檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>108cfu/μg DNA。
操作說(shuō)明:
1.Stbl3感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中),加入目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手打EP管底輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。 
2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 
3.向離心管中加入0.9mL室溫S.O.C.培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基(推薦使用SOC培養(yǎng)基,可提高轉(zhuǎn)化效率)。
4.30℃,225rpm復(fù)蘇90分鐘。(當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí),30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率,若轉(zhuǎn)化control PUC19計(jì)算轉(zhuǎn)化效率,則需37℃,225rpm復(fù)蘇60分鐘。) 
5.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C.培養(yǎng)基上。 
6.將平板倒置放于30℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。(若轉(zhuǎn)化controlPUC19計(jì)算轉(zhuǎn)化效率,則需37℃培養(yǎng)過(guò)夜)

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