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Electroporation發(fā)根(電擊)感受態(tài)細胞

簡要描述:Ar A4 Electroporation-Competent Cell/Electroporation發(fā)根(電擊)感受態(tài)細胞
保存條件:-80℃

  • 產(chǎn)品型號:Ar A4
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-25
  • 訪  問  量:492

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABN406-50
規(guī)格50支50ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途細胞培養(yǎng)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

Ar A4 Electroporation-Competent Cell 發(fā)根(電擊)感受態(tài)細胞

基因型:

Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine typ

簡要說明:

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌,它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.A4發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒,具有廣泛的宿主范圍(玉米,煙草,胡蘿卜,甘草等),同時具有ka那霉素抗性。Ar.A4發(fā)根農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化:經(jīng)pK7WGF2質(zhì)粒 (size:11876 bp)檢測轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA。

操作說明:

一: 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發(fā),待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。 

二: 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘,待其融化,加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(體積不大于6ul,最好用試劑盒抽提,雙蒸水溶解;轉(zhuǎn)化效率較高,第一次使用前最好做預(yù)實驗確定所加質(zhì)粒的量),用手bo打管底混勻,立即插入冰中,用200μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?;旌衔锟焖僖频诫姄舯?,蓋上杯蓋,空管保留待用。 

三:啟動電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置參數(shù):C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此參數(shù)為Biorad 推薦,使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作),將電擊杯從冰中拿出,吸水紙吸干外表面水份,快速放入電轉(zhuǎn)槽中,啟動電擊,電擊完成快速插入冰中,加入1 ml無抗生素的TY,并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中,28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。 

四: 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的TY平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天。

注意事項:

一:加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。 

二: 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞中不可混入氣泡,轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。 

三:平板上陽性克隆密度過大時,由于營養(yǎng)不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量或最終用于涂板的菌量。 

四:Ar.A4具有ka那霉素抗性,不可用于具有ka那霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。



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