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Electroporation發(fā)根(電擊)感受態(tài)細胞

簡要描述:MSU440 Electroporation-Competent Cell/Electroporation發(fā)根(電擊)感受態(tài)細胞
保存條件:-80℃

  • 產(chǎn)品型號:MSU440
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-25
  • 訪  問  量:448

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABN408-50
規(guī)格50支100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途細胞培養(yǎng)應用領域化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

MSU440 Electroporation-Competent Cell 發(fā)根(電擊)感受態(tài)細胞

基因型:

Agrobacterium rhizogenes(strR ) MSU440 Ri (agropinetype)

簡要說明:

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌,它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.A4發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質粒,具有廣泛的宿主范圍(玉米,煙草,胡蘿卜,甘草等),同時具有ka那霉素抗性。MSU440發(fā)根農(nóng)桿菌電轉感受態(tài)特別適用于大質粒的轉化:經(jīng)pK7WGF2質粒 (size:11876 bp)檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。

操作說明:

一: 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發(fā),待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。

二: 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘,待其融化,加入0.01-1 μg質粒DNA(體積不大于6ul,最好用試劑盒抽提,雙蒸水溶解;轉化效率較高,第一次使用前最好做預實驗確定所加質粒的量),用手bo打管底混勻,立即插入冰中,用200μl槍頭將感受態(tài)-質?;旌衔锟焖僖频诫姄舯校w上杯蓋,空管保留待用。

三:啟動電轉儀,設置參數(shù):C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此參數(shù)為Biorad 推薦,使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作),將電擊杯從冰中拿出,吸水紙吸干外表面水份,快速放入電轉槽中,啟動電擊,電擊完成快速插入冰中,加入1 ml無抗生素的TY,并轉移到感受態(tài)空管中,28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。

四: 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的TY平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天。

注意事項:

一:加入質粒時體積不應大于感受態(tài)體積的1/10;質粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉化效率急劇下降;質粒增大一倍,轉化效率下降一個數(shù)量級。

二: 電轉感受態(tài)細胞中不可混入氣泡,轉化高濃度的質??上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。

三:平板上陽性克隆密度過大時,由于營養(yǎng)不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應減少質粒用量或最終用于涂板的菌量。

四:MSU440具有l(wèi)ian霉素抗性,不可用于具有l(wèi)ian霉素抗性質粒的轉化。

備注:

1、農(nóng)桿菌相關抗生素配方:

image.png

2、常用農(nóng)桿菌抗性:(R:抗;S:敏感。)

image.png

3、TY配方(1L):

Tryptone 5gYeast extract 3g補水到1L體積,wan全溶解后,121度、20分鐘高溫滅菌配制1M的氯化鈣水溶液,121度、20分鐘高溫滅菌每1L 滅菌的TY液體營養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。若配制TY固體培養(yǎng)基,則加入15g 瓊脂粉。




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