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Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞

簡要描述:EPI300 Chemically Competent Cell/Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞
保存條件:-80℃

  • 產(chǎn)品型號:GT115
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-21
  • 訪  問  量:507

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號ABG026-50
規(guī)格50支100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

GT115 Chemically Competent Cell

基因型:

F- mcrA?(mrr-hsdRMS-mcrBC) f80lacZDM15?lacX74 recA1rpsL (StrR) endA1 ?dcm uidA(DMluI)::pir-116?sbcC-sbcD

簡要說明:

GT115菌株,是專門用來克隆含有發(fā)夾結(jié)構(gòu)(Hairpin)或重復(fù)序列等DNA二級結(jié)構(gòu)的基因序列的大腸桿菌菌株。大腸桿菌中存在一種SbcCD蛋白復(fù)合體,可以識別DNA發(fā)夾結(jié)構(gòu),并將其切除;將sbcC和sbcD兩個基因突變,增強(qiáng)了發(fā)夾結(jié)構(gòu)DNA的穩(wěn)定性。同時在大腸桿菌基因組中引入uidA(DMluI)::pir-116,使GT115可以表達(dá) 兀 蛋白,含有R6Kgori復(fù)制子的質(zhì)粒( pCpG-mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA …)可以正常復(fù)制。rpsL賦予GT115lian霉素抗性,同時該菌株還含有核酸酶 (endA)突變、重組酶 (recA)突變,增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性。GT115感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×108 cfu/μg DNA。

操作說明:

1. 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,待菌塊融化,加入目的 DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物) 并用手bo打 EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25 分鐘。

2. 42℃水浴熱激 45秒,迅速放回冰上并靜置 2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌SOC 或LB培養(yǎng)基,混勻后 37℃,200 rpm復(fù)蘇 60分鐘。 

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取 100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng) 6.5 小時以上

注意事項(xiàng):

1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8 分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入目的 DNA 時應(yīng)輕柔操作。 

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。





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