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Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細胞

簡要描述:MG1655 Chemically Competent Cell/ Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細胞
保存條件:-80℃

  • 產(chǎn)品型號:MG1655
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-21
  • 訪  問  量:497

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABG029-50
規(guī)格50支100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途細胞培養(yǎng)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

MG1655 Chemically Competent Cell

基因型:

K12 F- llambda- ilvG- rfb-50 rph-1

簡要說明:

MG1655菌株來源于W1485,是K12的衍生菌株,是一種經(jīng)過較少改造,比較接近于“WT-野生型"的大腸桿菌工程菌株。MG1655外觀形態(tài)標(biāo)準(zhǔn),同時可做為擴增大腸桿菌WT型基因的模板使用,也可作為蛋白表達的宿主菌株使用,但不含核酸酶endA1突變,體內(nèi)核酸酶含量較高,提取質(zhì)粒時務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶,以防提取的質(zhì)粒被降解。pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>0.5×108 cfu/μg DNA。

操作說明:

1.感受態(tài)細胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中),加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手bo打EP管底輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。 

4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。 

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15h。

注意事項:

1. 感受態(tài)細胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化,融化后8分鐘內(nèi)加入質(zhì)粒, 否則會影響轉(zhuǎn)化效率。 

2.混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。 

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。



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